一、 单B细胞抗体开发技术概述

艾靶生物基于免疫反应的内在应答机制开发了Fast-Ab平台，能在4-5周内使小鼠或兔子的抗原抗原免疫效价达到百万以上，为单克隆抗体的筛选提供了丰富的多样性。单B细胞抗体开发技术是一种基于单个抗原特异性B细胞直接获取抗体基因的现代方法，能表达天然配对的抗体可变区基因，高效制备高亲和力单克隆抗体(图 1)。该技术解决了传统杂交瘤技术融合效率低、噬菌体展示技术重轻链错配等问题，已成为抗体药物发现的核心工具，并推动了精准医疗的发展

相较于传统单 B 细胞培养平台（如 Beacon），艾靶生物的单B细胞测序平台可高通量获取大量抗原特异性B细胞抗体序列，并结合抗体序列进化树与差异性分析，显著提升了高亲和力抗体及靶向不同表位抗体的筛选效率。

艾靶生物的单B细胞抗体技术平台不仅适用于筛选低免疫原性或小分子抗原的抗体筛选，也有助于功能性中和抗体的发现，以及ELISA试剂盒的开发。在传染病领域，它大幅提高了从人PBMC中筛选病原微生物中和抗体的效率。

艾靶生物推出的单B细胞平台，在多个关键指标上展现出强劲竞争力：

* 抗体多样性：覆盖至少 2 个不同表位

* 抗体亲和力：可达 nM 水平

* 项目周期：仅需 11–15 周

性价比优势：为客户提供更优质、高效的服务。

图1. 单B细胞抗体开发流程

一、 项目案例

案例一：通过单B细胞抗体开发流程开发的靶向某个化合物的鼠和兔单抗

案例二：某个靶点的ELISA试剂和抗体对开发

1. 单抗筛选（基于AgX-Fc）

ELISA板包被AgX-Fc，使用克隆表达的单抗检测，此批次有10个单抗可结合AgX-Fc

#抗体结合AgX-Fc的亲和力排序：

C4 > C3 > C8 > C7 C23 > C5 > C1 > C9 C4 C2

1. 抗体表位分析（基于AgX-Fc）

竞争性ELISA分析表位：包被AgX-Fc，加入竞争性抗体（无标记，100X浓度）与检测抗体（biotin标记，1X浓度），通过对检测抗体信号抑制情况对抗体识别表位进行归类。

# C5-C23，C9-C18存在竞争，说明其识别表位重合或者空间位置邻近，在后续抗体配对中应避免同时使用。

1. 检测天然AgX

使用分泌AgX的细胞培养上清进一步验证。

1) RBE（AgX^Low）与HuCCT1（AgX^High）培养上清（无血清，血清中蛋白会影响包被效果）包被ELISA板，使用抗体检测

# 与预期一致，部分抗体可检测在HuCCT1上清中有较强信号，RBE上清信号均弱。

1) 竞争ELISA分析表位

# C4亲和力最强，sandwich ELISA中可用做捕获抗体；C3 C5 C9 C12 C18 C23较弱，可用做检测抗体。

# C3-C9，C5-C23，C9-C18存在竞争。

# 抗体对上清与AgX-Fc的检测灵敏度不一致，-Fc确实会影响检测效果，需要使用其他形式重组蛋白作为定量的标样。

1) 建立sandwich ELISA

3.1 ）使用C4作为捕获抗体（CAP Ab），其余抗体作为检测抗体（DET Ab, biotin标记），检测细胞培养上清。

# 此组合可检测HuCCT1上清，DET抗体累加可提高灵敏度

3.2）进一步对CAP Ab与DET Ab进行组合，以提高检测灵敏度。

CAP Ab备选：C4, C4+C12

DET Ab备选：C5, C5+C3, C5+C9

1) sandwich ELISA检测Ag-X